Elektronik Sigara icen ve icmeyenlerin akut solunum karsilastirmasi Raporu - 2

Yöntemler
Popülasyon ve biyolojik örnekleri incelemek
Araştırma konuları, Weill Cornell Tıp Fakültesi Klinik Çeviri ve Bilim Merkezi ve IRB onaylı protokoller altında Genetik Tıp Klinik Araştırma Tesisi Bölümünde değerlendirildi (ClinicalTrials.gov Tanımlayıcı: NCT01776398 ve NCT02188511). Uygunluk, tıbbi öykü, fizik muayene, tam kan kimyası ve pıhtılaşma çalışmaları, karaciğer fonksiyon testleri, idrar analizi, göğüs röntgeni, EKG ve tam solunum fonksiyon testlerini içeren ayrıntılı bir tarama ziyaretinin ardından belirlendi. Sigara içmeyen "sigara içmeyen" fenotipi kendiliğinden rapor edilmiş ve idrarda tütün metabolitlerinin bulunmamasıyla doğrulanmıştır (idrar nikotini <2 ng / ml, idrar kotinin <5 ng / ml; bakınız Ek dosya 1 : Ek Yöntemler dahil etme / hariç tutma kriterleri ile ilgili detaylar için). 11 months agoÇalışmaya alındığında, herhangi bir tütün ürününe veya EC'ye maruz kalma öyküsü olmayan on sağlıklı hiç sigara içmeyen kişi, 1. günde (bazal), Elektronik Sigara kullanımından sonra değerlendirilecek semptomlar, hayati belirtiler (kan basıncı, sıcaklık, kalp) ile ilgili bir anket formu ile değerlendirildi. oranı, solunum hızı), O 2 küçük hava yolu epiteli örnek fırçalamalar ile doyma, göğüs X-ışını, akciğer fonksiyonu, plazma ÇYP'ler ve bronkoskopi (SAE, 10.-12 sipariş bronşlar) ve (AM alveoler makrofajlar elde etmek için bronkoalveoler lavaj) de bazal. Bir hafta sonra, denekler EC'nin nasıl kullanılacağı konusunda eğitildi, sonra "Blu" marka EC'den 10 nefes aldı, 30 dakika bekledi, daha sonra 10 nefes daha aldı. Toplam n  = 10 denekten, n  = 7, nikotin ve n ile Blu EC'ye randomize edildi. = 3 ila Blu EC, nikotin olmadan. 1. ve 2. Elektronik Sigara maruziyetlerinden hemen sonra anketler uygulanmış ve yaşamsal bulgular ve 02 doygunluğu değerlendirilmiştir. 2. Elektronik Sigara maruziyetinden 2 saat sonra akciğer fonksiyonu, plazma EMP'leri ve tekrar bronkoskopi fırçalama ve lavaj ile elde edildi. SAE ve lavaj hücrelerinin toplam hücre sayısı ve hücre farklılıkları ölçüldü. RNA dizilimi, taban çizgisinde ve Elektronik Sigara sonrası maruziyette toplanan SAE ve AM'den mRNA üzerinde yapıldı.

Plazma endotel mikropartiküllerinin karakterizasyonu
Endotelyal mikropartiküller daha önce tarif edildiği gibi ölçülmüştür [ 22 ]. Trombosit bakımından zengin plazma hazırlamak için kan 1 saat içinde toplandı ve işlendi. Süpernatan, 3 antikorla lekelenmiş trombosit zayıf plazma elde etmek için ayrıca 5 dakika içinde işlendi: kurucu endotel marker PECAM (CD31) ve kurucu trombete özgü glikoprotein Ib (CD42b). Pulmoner kapiller endotelinin yüksek EMP seviyelerine nispi katkısının varlığını değerlendirmek için, CD42b - CD31 + EMP'ler ACE'nin pulmoner kapiller endotelinde bol miktarda eksprese edildiği bilgisine dayanarak anti-insan anjiyotensin dönüştürücü enzim (ACE) ile birlikte boyandı [ 22]. , 23]. Her antikor için optimize edilmiş durum, seri seyreltme ile belirlendi. Ölçümlerin tekrarlanabilir olmasını sağlamak için EMP ölçümleri iki kez yapıldı. CD42b - CD31 + mikropartikül seviyeleri izotip kontrollerine normalleştirildi.

Küçük hava yolu epiteli ve alveoler makrofaj transkriptomları
SAE daha önce tarif edildiği gibi esnek bronkoskopi kullanılarak 10. ve 12. sıradan bronşlardan toplandı [ 18 ]. SAE hücreleri, 5 ml buz gibi soğuk Bronşiyal Epitel Bazal Ortamı (BEBM, Lonza, Basel, İsviçre) içine uçurularak sitoloji fırçasından uzaklaştırılmıştır ve işlenene kadar buz üzerinde tutulmuştur. Toplam hacmin beşte biri hücre canlılığı ve diferansiyel analiz için çıkarıldı ve geri kalan numune hemen işleme tabi tutuldu ve sonraki RNA saflaştırmasına kadar -80 ° C'de TRIzol reaktifinde (Invitrogen, Carlsbad, CA) saklandı.

AM bronkoalveoler lavaj (BAL) ile düzeldi [ 20 ]. Site başına infüze edilen maksimum hacim, her bir birey için iki bölgeye kadar olan 150 ml idi. İnfüzyon hacminin geri kazanımı% 56.2 ile% 65.5 arasında değişmiştir (Tablo 1 ). Geri kazanılan tüm sıvı önce gazlı bezden süzüldü ve 1250 rpm'de 5 dakika santrifüjlendi. Hücre topağı, ACK lizleme tamponunda (5 mi, 23 ° C, 5 dakika; Invitrogen, Carlsbad, CA) yeniden süspanse edildi ve daha sonra iki kez% 9 fetal sığır serumu (Sigma Aldrich) içeren 10 ml RPMI 1640 ortamında (Invitrogen) yıkandı. , St. Louis MO) ve% 1 penisilin ve streptomisin (Invitrogen). Canlılığı değerlendirmek için tripan mavisi hariç tutulan bir hemasitometre kullanılarak bir hücre sayımı yapıldı. Hücre peleti, 10 6'lık bir konsantrasyona kadar seyreltildi.hücre / ml olmuştur. Diferansiyel hücre sayıları, Diff-Quik ile boyanmış sitosantrifüj edilmiş 400 ul'lik bir kısım üzerinde gerçekleştirildi. Geri kalan hücreler 2 x 10 6-çukurlu plastik kültür tabakların 6 yuva başına / 2 ml hücre ve% 5 CO gece boyunca 37 ° C'de inkübe 2 yapışma [tarafından AM saflaştırma imkan vermek için 21 ]. Toplam hacmin beşte biri hücre canlılığı ve diferansiyel analiz için çıkarıldı ve geri kalan numune hemen işleme tabi tutuldu ve sonraki RNA saflaştırmasına kadar -80 ° C'de TRIzol reaktifinde (Invitrogen, Carlsbad, CA) saklandı.

Tablo 1 çalışma popülasyonunun demografik ve biyolojik numuneler bir
Tam boy masa
Hem SAE hem de AM için, toplam RNA, RNeasy kolonları (Qiagen, Valencia, CA) kullanılarak nihai numune temizliği ile TRIzol yöntemi kullanılarak özümlendi. RNA miktarı ve kalitesi, sırasıyla Nanodrop ND-1000 (Thermo Scientific, Wilmington, DE) ve Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) tarafından değerlendirildi. Toplam RNA (0.5 ug), TruSeq v2 mRNA kütüphanesi hazırlığını takiben Illumina HiSeq2500 üzerindeki RNA dizilimi (2 x 125 bp) New York Genom Merkezi'ne gönderildi. Veriler, NCBI Gene Expression Omnibus'da (GEO erişim numarası: GSE85121) halka açık olarak bulunmaktadır. NYGC RNA-Seq verilerinden Illumina HiSeq eşleştirilmiş uç okumaları, GRCh37 / hg19 insan referans genomuna ve RefSeq gen tanımlarına (2014-06-02) göre okumaları hizalamak için STAR (2.3.1z13_r470) ile işlendi. Gen ekspresyon ölçümü Kol Düğmeleri (2) kullanılarak yapıldı. 2) RefSeq gen tanımlarına karşı. Transkript uzunluğu ve kapsama derinliğini düzeltmek için, Kol Düğmeleri aynı RefSeq gen tanımını kullanarak ekspresyon için dizilmiş (FPKM) milyon parça başına ekson başına kilobaz başına fragmanlara hizalanmış okumaları dönüştürür. SAE ifadesi için, FPKM> 0.125'in değerleri dahil edildi [24 ], AM ifadesi için, FPKM> 0.08'in değerleri dahil edildi.

4 months agoistatistik
FPKM verileri, Partek Genomics Suite Yazılımı versiyon 6.6'da (Partek, iqos 3 multi St. Louis, MO) ithal edildi ve değerlendirildi. Kıvrım değişikliği, iqos 2.4 plus zararlari Elektronik IQOS Heets Amber Sigara TütüNü / en küçük kare ortalama eşleştirilmiş bazik numunelerin akut aerosol solunmasının en küçük karesi ortalaması olarak belirlenmiştir. Bir p 1,5 ± değeri eşiği olarak tayin edilmiştir. SAE ve AM RNA sekans verileri, Aspire Spryte Elektronik Sigara SAE ve AM'deki nAChR'nin ekspresyonunu tanımlamak için de kullanılmıştır. EC'nin akut aerosol solunmasından etkilenen önemli genlerle ilişkili moleküler yollar, Yaratıcılık Yolu Analizi kullanılarak incelenmiştir.
11.09.2019 06:09:53
clarissa.dhakiyarr94
Name
Email
Comment
Or visit this link or this one